用聚丙烯酰胺為支持基質(zhì)的電泳程序。一般說(shuō)來(lái),實(shí)現(xiàn)聚丙烯酰胺凝膠電泳有兩種類型。
1、單向電泳:采用完整的蛋白質(zhì)或用十二烷基硫酸鈉(SDS)處理的蛋白質(zhì)的單向泳動(dòng),在有凝膠的平板上平行分離(過(guò)去也有用在玻管中的圓筒形棒狀凝膠進(jìn)行電泳的,現(xiàn)已很少有人使用)。
2、雙向電泳:首先用天然蛋白質(zhì)進(jìn)行分離,然后凝膠平板再用SDS處理,樣品便在第二向得到分離。第一次分離了各種各樣的蛋白質(zhì),因此第二向分離的是蛋白質(zhì)亞基。 主要優(yōu)點(diǎn)是:
⑴合成聚合物,故重復(fù)性良好;
⑵分離能力好;
⑶通過(guò)增減丙烯酰胺單體和交聯(lián)劑(N,N′-亞甲基雙丙烯酰胺)的濃度,可以調(diào)節(jié)凝膠的孔徑大??;
⑷操作簡(jiǎn)便、時(shí)間短;
⑸化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、機(jī)械性能好,柔軟;
⑹在酸性或堿性緩沖液中均可進(jìn)行電泳,而且可加入兩性電解質(zhì)進(jìn)行等電點(diǎn)電泳,可用含電解質(zhì)表面活性劑(SDS)或非電解質(zhì)表面活性劑(Np40、Tritonx-100等)的凝膠進(jìn)行電泳,亦可使兩者組合進(jìn)行雙向電泳等等,使用范圍廣泛,利用價(jià)值日益提高;
⑺由于染色技術(shù)的進(jìn)步,可以進(jìn)行定量,也可檢測(cè)出極微量的斑點(diǎn)(瓊脂糖電泳)。